O que é qPCR?
A qPCR (reação em cadeia da polimerase em tempo real) é uma técnica amplamente utilizada na biologia molecular, reconhecida por sua alta precisão, sensibilidade e confiabilidade analítica. Trata-se de um método minucioso que permite a detecção e o monitoramento da amplificação de material genético em tempo real, sendo considerado um padrão de excelência em análises laboratoriais.
A técnica de PCR tem como princípio a detecção de um alvo específico de material genético, que pode ser DNA, no caso da qPCR, ou RNA, no caso do RT-qPCR, que inclui uma etapa adicional de transcrição reversa. De modo geral, o alvo analisado corresponde a regiões genéticas de interesse clínico, econômico e/ou industrial, o que reforça a relevância da técnica em diferentes segmentos.
PCR em tempo real como método confirmativo
Um exemplo amplamente conhecido da aplicação da PCR ocorreu durante a pandemia de COVID-19, quando a técnica foi utilizada como principal ferramenta diagnóstica para a identificação de pessoas infectadas pelo vírus. Essa identificação só foi possível porque a PCR permite detectar fragmentos específicos e exclusivos do material genético viral, garantindo elevada especificidade.
Esse mesmo princípio se aplica a diversas outras análises, uma vez que microrganismos, como bactérias, vírus e fungos, possuem um perfil genético característico, que funciona como um verdadeiro código de identificação molecular. Por esse motivo, a PCR em tempo real é considerada um método confirmativo, pois fornece resultados robustos, reduzindo significativamente a ocorrência de falsos positivos e falsos negativos.
Detecção em tempo real e alta sensibilidade
A técnica permite a visualização do resultado ao longo do ensaio por meio da emissão e detecção de fluorescência, realizada em um equipamento específico chamado termociclador em tempo real. A cada ciclo da reação, ocorre a amplificação exponencial do material genético, possibilitando a detecção progressiva do alvo. Na ausência do material genético de interesse, não há amplificação nem emissão de sinal detectável.
Outro diferencial importante da técnica é sua alta sensibilidade, que permite identificar quantidades mínimas de material genético com elevado grau de precisão. Essa característica torna a (RT)qPCR essencial em situações nas quais o alvo está presente em baixa concentração ou quando é necessária uma confirmação analítica criteriosa.
Importância dos controles e do rigor operacional
Devido ao seu baixo limite de detecção, esse método exige uma execução extremamente cuidadosa. Todas as etapas do processo — desde o manuseio das amostras e dos reagentes até as condições do ensaio — devem seguir rigorosamente as boas práticas laboratoriais. Isso inclui a limpeza adequada de bancadas e superfícies, bem como o correto manuseio dos insumos.
A confiabilidade dos resultados também depende da inclusão de controles analíticos, tais como:
- Controles positivos, que confirmam a eficiência da reação;
- Controles negativos, que auxiliam na identificação de possíveis contaminações;
- Controles internos, que avaliam a integridade da amostra e a eficiência do processo analítico.
Esses controles são fundamentais para assegurar a qualidade, a rastreabilidade e a confiabilidade dos resultados obtidos.
Aplicações práticas e confiabilidade dos resultados
Na prática, esse método confirmativo é aplicado como dupla confirmação em testes de esterilidade de produtos previamente estéreis, como propés, lenços e swabs, especialmente quando há necessidade de rápida liberação do material ou quando há resultados inconclusivos ou dúvidas em análises anteriores. Além disso, a técnica é utilizada na avaliação da viabilidade de meios específicos para biologia molecular, como o meio de transporte viral (MTV) e o meio de transporte molecular (MTM).
Mais do que uma técnica de detecção, essa abordagem analítica é altamente precisa, específica e confiável. Sua capacidade de confirmar resultados com elevado grau de confiança a torna uma ferramenta indispensável para laboratórios que buscam excelência técnica, padronização e segurança analítica.
*Com informações de Giuliana Portella – Setor de Qualidade da BBV.
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